PCR para Trichomonas Vaginalis

La PCR (Reacción en cadena de polimerasa) es el mejor método para diagnosticar la infección causada por la Trichomona Vaginalis, ya que resulta en una detección más rápida y económica.

Se utilizaron muestras de orina de primera micción recolectados en tubos de plástico estériles, se congelan inmediatamente a -20˚C, en el laboratorio se descongelan y centrifugan durante 10min. Se aspiran los sobrenadantes y se transfieren los sedimentos a tubos que contienen PBS (Buffer fosfato salino).

Se realizan 40 ciclos de:

    Desnaturalización.- durante 30 segundos a 94˚C.

    Hibridación.- durante 1 minuto y 30 segundos a 63˚C.

    Extensión.- durante 1 minuto y 30 segundos a 72˚C.

Bibliografía

Noh C, Kim S, Park S, Moon H, Hong Y, Ryou J. Comparison of Two PCR Assays for Trichomonas vaginalis. Korean J Parasitol [Interntet] 2019 [Consultado 25 de diciembre de 2021]; 57(1): 27–31. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6409213/ 

Extracción del ácido nucléico

 

1) Alteración celular: romper la pared celular y/o membranas celulares.

2) Eliminación de lípidos de membrana, proteínas y otros ácidos nucleicos.

3) Purificación del ácido nucléico.

Bibliografía:

Ali N, Rampazzo R, Costa A, Krieger M. Current Nucleic Acid Extraction Methods and Their Implications to Point-of-Care Diagnostics. Dondero F, editor. Biomed Res Int [Internet]. 2017;2017:9306564. Disponible en: https://doi.org/10.1155/2017/9306564 

Normas Básicas de Bioseguridad en el Laboratorio de Biología Molecular

 1.- Leer la guía de laboratorio para comprender los objetivos, conceptos básicos y el procedimiento a seguir durante la actividad.

 2.- Preparar y reservar los materiales, equipos y reactivos o soluciones necesarias para el desarrollo de la práctica. Leer las fichas técnicas y de seguridad (MSDS) de los reactivos que van a ser usados durante la experimentación.

 3.- Utilizar elementos de protección (bata de laboratorio, guantes, gafas de seguridad, máscaras para gases y zapatos con suela antideslizante). La bata y los zapatos deben mantenerse bien cerrados para evitar accidentes.

Bibliografía: 

Suarez H, Escobar R, Zapata P, Gallego G, Tohme J. Guía de Laboratorio de Biología Molecular en la Escuela. Cali: CIAT; 2014

Presentación