Técnica FISH para detección de Trichomona Vaginalis

Para detectar la infección por Trihomona Vaginalis con el método FISH (hibridación fluorescente in situ) se deben realizar los siguientes pasos:

1. Fijación: los frotis se sumergen en parafolmaldehído al 4%, después en etanol al 50% durante 10 minutos, esto en cada solución.

2. Hibridación: se cubren las muestras con 20μl de solución de hibridación, luego se cubren los frotis con cubreobjetos y se incuban en cámaras húmedas a 60ºC durante 90 minutos.

3. Lavado: se retira el cubreobjetos y se sumerge el portaobjetos en una solución de lavado precalentada durante 30 minutos a 60ºC, después se deja la muestra secar al aire.

4. Detección de las células: se añade una gota de aceite de inmersión no fluorescente a la muestra, se cubre con un cubreobjetos y se visualiza al microscopio de epifluorescencia. 

Bibliografía:

1.	Machado A, Castro J, Cereija T, Almeida C, Cerca N. Diagnosis of bacterial vaginosis by a new multiplex peptide nucleic acid fluorescence in situ hybridization method. PeerJ [Internet]. 2015 [citado el 8 de enero de 2022];3:e780. Disponible en: https://peerj.com/articles/780/

 

 

PCR para Trichomonas Vaginalis

La PCR (Reacción en cadena de polimerasa) es el mejor método para diagnosticar la infección causada por la Trichomona Vaginalis, ya que resulta en una detección más rápida y económica.

Se utilizaron muestras de orina de primera micción recolectados en tubos de plástico estériles, se congelan inmediatamente a -20˚C, en el laboratorio se descongelan y centrifugan durante 10min. Se aspiran los sobrenadantes y se transfieren los sedimentos a tubos que contienen PBS (Buffer fosfato salino).

Se realizan 40 ciclos de:

    Desnaturalización.- durante 30 segundos a 94˚C.

    Hibridación.- durante 1 minuto y 30 segundos a 63˚C.

    Extensión.- durante 1 minuto y 30 segundos a 72˚C.

Bibliografía

Noh C, Kim S, Park S, Moon H, Hong Y, Ryou J. Comparison of Two PCR Assays for Trichomonas vaginalis. Korean J Parasitol [Interntet] 2019 [Consultado 25 de diciembre de 2021]; 57(1): 27–31. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6409213/ 

Extracción del ácido nucléico

 

1) Alteración celular: romper la pared celular y/o membranas celulares.

2) Eliminación de lípidos de membrana, proteínas y otros ácidos nucleicos.

3) Purificación del ácido nucléico.

Bibliografía:

Ali N, Rampazzo R, Costa A, Krieger M. Current Nucleic Acid Extraction Methods and Their Implications to Point-of-Care Diagnostics. Dondero F, editor. Biomed Res Int [Internet]. 2017;2017:9306564. Disponible en: https://doi.org/10.1155/2017/9306564 

Normas Básicas de Bioseguridad en el Laboratorio de Biología Molecular

 1.- Leer la guía de laboratorio para comprender los objetivos, conceptos básicos y el procedimiento a seguir durante la actividad.

 2.- Preparar y reservar los materiales, equipos y reactivos o soluciones necesarias para el desarrollo de la práctica. Leer las fichas técnicas y de seguridad (MSDS) de los reactivos que van a ser usados durante la experimentación.

 3.- Utilizar elementos de protección (bata de laboratorio, guantes, gafas de seguridad, máscaras para gases y zapatos con suela antideslizante). La bata y los zapatos deben mantenerse bien cerrados para evitar accidentes.

Bibliografía: 

Suarez H, Escobar R, Zapata P, Gallego G, Tohme J. Guía de Laboratorio de Biología Molecular en la Escuela. Cali: CIAT; 2014

Presentación

 

Bienvenidos a mi Blog 💖

Mi nombre el Nicole Jácome, soy estudiante de medicina en la Universidad Central del Ecuador.

Este blog cumplirá la función de portafolio para la materia de Biología Celular y Molecular, en el cual se compartirá diversos temas de interés referente a la materia.

Espero que este blog sea de ayuda para obtener buena información y ampliar nuestros conocimientos.